A kritikailag elismert egyjátékos élmény visszatért az Assassin’s Creed: Brotherhood képében, mely jobb, mint valaha. Ezio-nak ezúttal ismét fel kell vennie a harcot a templomos renddel. Immáron ő egy legendás mester asszasszin, és el kell utaznia Olaszország legnagyobb városába, Rómába, a hatalom, a kapzsiság, és a korrupció melegágyába, hogy csapást mérjen az ellenfél szívére. A korrupt zsarnokok legyőzéséhez azonban nem csak erőre, de vezetésre is szükség lesz, ezért Ezio az egész testvériséget maga mellé hívja, hogy harcoljanak az ő oldalán. Csak a többi asszaszinnal együttműködve tudják legyőzni ellenfeleiket.